Diabetologia：激活但功能受到破坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身蛋白到消失1M-冠心病诊断征状的重大突破率在成年人初期就有很好的描述，多个口内自身蛋白中性的成年人之则有70%在血清转换成后10年内患冠心病，而随访15年的成年人这一数目减小到84%。相比之下之下，占诊断1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的发病机制还没有获得充分的科学研究。

越来越多的人开始使用依此种系统来度量1M-冠心病的重大突破：个微在消失多种口内自身蛋白时踏入第1期之中，消失血糖异常时踏入第2期之中，消失征状时踏入第3期之中。一些多发口内自身蛋白中性的个微，在1期和2期，重大突破较更慢，并发展为发病的1M-冠心病。我们此前描述了一两组在首次侦测到多种口内自身蛋白比对后数10年无冠心病的极更慢重大突破者，这两组病患者人数极少，但特征非常指明。随后，我们发现口内自身蛋白特异性CD8+T细胞核反不应在重大突破缓更慢的病患者之中前提不实际上，但在未来会发病和长期实际上的冠心病病患者之中很易于侦测到。这可能表明，与重大突破病患者相比之下，这些病患者自身免疫反不应的调节增强。

早期科学研究表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但冠心病病患者实际上一些功用缺陷，其之中之外对IL-2的反不应灵活性降低。此外，冠心病病患者之中的震荡CD4+T细胞核可能对调节更为重要抵抗性，乏善可陈为震荡T细胞核的其会减弱，自然产生的Treg和胃产生的其会Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞核之中IL-2反不应减弱。本科学研究的意在是描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群极缓更慢重大突破者之中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以青年人为了将的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病患者亲族之中检查1M-冠心病的危险状况。我们此前描述了长期缓更慢重大突破者的特征，他们保持良好多重口内自身蛋白中性多达10年，但没有消失冠心病的诊断征状，更慢性或非短暂性自身免疫。随后，10名继续保持良好无冠心病并愿意提供大量血液比对的缓更慢重大突破者纳入T和B细胞核功用比对。在目前的科学研究之中，8名更慢重大突破者(SP两组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身蛋白中性。所有的自发性都处于1M-冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后耗尽了口内自身蛋白对某些蛋白的中性反不应，然而，一名病患者仍未处于2期数6年，但没有消失诊断征状，一名病患者被病症为冠心病，该受试者72岁，在野外实验比对时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据比对之中对该诱导进行时了单独审核。除去外周血单个核细胞核(PBMCs)，换用多参数流式细胞核妖术和T细胞核其会实验审核诱导之中Treg的高频率、表M-和功用。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)进行时无监督聚类比对，审核Treg表M-。

结果：与保健诱导相比之下，来自更慢重大突破微的知觉CD4+T细胞核的监督聚类揭示，激来时的知觉CD4+ Treg高频率减小，与免疫抑制其会的TNFR之外复合物(GITR)表达出来减小有关。一名HbA1c下降时的病患者与重大突破缓更慢者和冗余的对照两组相比之下，Treg谱有所相同。功用结果表明，与保健诱导相比之下，来自缓更慢重大突破微的Treg介导的CD4+震荡T细胞核其会明显受到破坏。乏善可陈为对震荡CD4+T细胞核CD25和CD134表达出来的其会减小。

左图1 深入的表M-比对揭示，CD4+Treg亚M-在更慢重大突破表头之中减小。由FlowSOM转化成的Treg室，挤满在来自所有诱导的来时CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物表达出来鉴定出10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)使用9个相同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个路由代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由两组周围制做。每个路由之中的饼左图暗示单个标上的表达出来级别。(b)每个元聚类的热左图，以揭示既有标上表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化成左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的很薄。(e-l)相比之下丰度为每个metacluster箱子支线左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。红色格子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 使用CITRUS的预测模M-证实，Treg高频率的减小是重大突破缓更慢的字样。分级制度除此以外(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP自发性和冗余的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表达出来进行时除去，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(斑点)两组以及诱导SP 606(红色)之中CD25+ cd127的高频率汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外开集的箱子支线左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，圆圈突出的簇被标识为SP和HD表头两者之间的相同。(j)箱子支线左图揭示了在SP(斑点)和HD(灰点)两组之中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比之下丰度(数目)。(k)直方左图揭示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标上相比之下表达出来与背景表达出来(红色);上列，磁盘Treg_3;下面一路上，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇之中标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩检验

左图3 与保健献血者相比之下，重大突破缓更慢者知觉treg的GITR减小。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表达出来标上的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达出来热左图(sp606不之外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之中所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表达出来串联，揭示直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon以此类推记号秩和检验，p< 0.07(红色)所有诱导之外，p< 0.05(红色)诱导SP 606和冗余的HD不之外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表达出来，从分级制度除此以外，从所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串联，揭示直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推记号秩检验

左图4 来自缓更慢重大突破的CD4+ treg细胞核控制震荡CD4+T细胞核的灵活性降低。SP两组用红色的支线和格子暗示，HD两组用黄色的支线和格子暗示，红色的支线/格子暗示诱导sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按观察的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培养3当晚进行时流式细胞核妖术侦测。(a-d)与CD4+转发者相比之下不应的treg培养(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE其会平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的其会平均值。使用中性对照(激来时的拥护细胞核不含treg)推算其会平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 震荡CD4+T细胞核对缓更慢重大突破的T细胞核来时化的其会更敏感。SP两组用红色的支线和格子暗示，HD两组用黄色的支线和格子暗示，红色的支线/格子暗示诱导sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按观察的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培养3当晚进行时流式细胞核妖术(CD25反染)和细胞核因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE其会百分率(b)。(c,d) CD25其会百分率(c)和CD134其会百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院之中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们推论的事实是，来自缓更慢重大突破子的来时化知觉CD4+Treg在GITR表达出来之中获得了扩展和比较丰富，强调了更进一步科学研究Treg在1M-冠心病高风险个微之中的异质性的更更进一步。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28